Extracción de ADN vegetal y animal

El ácido desoxirribonucleico o ADN, es la molécula que contiene toda la información genética, las instrucciones de diseño de todos los seres vivos, desde la bacteria más simple hasta la gran ballena azul o el árbol de secuoya que mide 115.56 m. En el ADN hay decenas de miles de genes.  Toda la información está contenida en el núcleo de cada célula.

Les presento una serie de imágenes que muestran las diferentes etapas para extraer el ADN a plantas y animales, en este caso la información la mostrarán los estudiantes de Biología General.   

Necesitan los siguientes materiales:

1.- Muestra de material biológico: hígado, cebolla, brócoli y plátano.

2.- Agua destilada 

3.- Solución de NaCl 2M

4.- Detergente líquido que sea espeso.

5.- Alcohol Absoluto (etanol)

6.- Tubos de ensayo

7.- Batidora y un cuchillo.

8.- Gasas

Siguiendo estos pasos sencillos, podrás preparar todo:

1- Todos los reactivos y materiales deben ser colocados en hielo para que la temperatura no afecte la muestra.  Colocar la muestra de material vegetal o animal en la batidora y hacer un extracto, luego tomar una gasa y filtrar (Fig.2). Colocar el homogenizado en agua con hielo (Fig.1).  

Se licúa la muestra, para romper la pared celular y la membrana plasmática y acceder al núcleo.  El objetivo es destruir la membrana nuclear y dejar libre el ADN.

2-    2-  Cortamos tres rebanadas de piñas en trozos pequeños, luego colocamos la piña junto a agua fría en una batidora, procedemos a licuar, luego filtramos con una gasa, y el extracto lo guardamos en hielo (Fig.1).

      La piña posee una enzima llamada bromelina, una proteasa que rompe los enlaces de las proteínas y contribuye a eliminarlas de la muestra de ADN, para que no la contaminen.      

3- La solución de NaCl 2M debe mezclarse con el detergente.   Los jabones utilizados emulsionan los lípidos de las membranas celulares y las rompen, mientras que el detergente evita la unión de las proteínas al ADN.

4- Al homogenizado de la muestra animal o vegetal debe agregarle la solución de piña y luego la solución de detergente.

5- Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua (Fig.3-5).

Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa. Es por eso que vemos unos grumos espesos.

El protocolo en imágenes:

  

Figura 1.  Los reactivos y tubos de ensayos deben ser colocados a temperaturas bajas. En la figura derecha se puede observar el extracto de piña, el homogenizado de hígado, brócoli y la solución con  detergente.

Figura 2.  Preparación de extractos vegetal. A. Plátano, B. Brócoli, C-D. Cebolla triturada en la licuadora.

Figura 3. Tubos con homogenizados siguiendo paso 3. A. Agregar etanol a la muestra poco a poco hasta que se separen en dos capas. B. Se puede ver las fibras de ADN de hígado separándose.

Figura 4. Muestras con fibras de ADN. A. Hígado, B. Brócoli, C. Cebolla, D. Plátano.

Finalmente, tenemos una gran sonrisa cuando hacemos un buen trabajo y la muestra de fibras de ADN son evidentes.

Figura 5. Muestra de fibras de ADN de hígado.